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淺析核酸檢測PCR試劑盒的作用與意義所在

瀏覽次數(shù):560發(fā)布日期:2022-08-15
  核酸檢測PCR試劑盒和紫外凝膠成像系統(tǒng)(紫外分析儀或手提紫外等)以及移液器都可能影響PCR檢測的質(zhì)量。PCR儀是控制PCR反應(yīng)溫度變化的,其溫度和控制時間的準確程度可能會影性PCR檢測質(zhì)量。移液器取液的準確程度影響反應(yīng)體系是否能達到反應(yīng)環(huán)境。紫外分析系統(tǒng)對檢測敏感性有明顯的影響。紫外分析系統(tǒng)有3種類型儀器:紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀直接用眼睛觀察瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶。
 
  紫外凝膠成像系統(tǒng)是在計算機上通過攝像系統(tǒng)對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察。手提紫外燈可以在電泳過程中直接對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察,使用方便,分辨率比較低。依據(jù)這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀有時能看到弱陽性擴增帶,在紫外凝膠成像系統(tǒng)上卻看不到。手提紫外燈只有在陽性擴增帶比較亮?xí)r才能看到,建議為保證檢測質(zhì)量建議不用手提紫外燈,可用于臨時的電泳結(jié)果觀察。
 
  核酸檢測PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成cDNA的反轉(zhuǎn)錄,以及后續(xù)的PCR擴增實驗。選用優(yōu)異的M-MLVRT酶,可以合成大于5kb的cDNA;反轉(zhuǎn)錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導(dǎo)致實驗失敗的風(fēng)險。本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實驗。
 
  測定RNA濃度按以下步驟進行操作:
 
  (1)取1u1RNA原液,放在0.5mlEP管中,加入249u1ddH20,用移液槍反復(fù)混勻。
 
  (2)用ddH20為空白對照,調(diào)節(jié)A260零點。
 
  (3)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用ddH20沖洗比色杯,再調(diào)節(jié)A280零點。
 
  (4)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A280值。計算A260/A280比值,比值≥1.8,滿足實驗要求。
 
  (5)RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/u1)。
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